質粒存在于許多細菌以及酵母菌等生物中，是細胞染色體外能夠自主復制的很小的環狀DNA分子。在基因工程中，質粒制備可將質粒作為目的基因的載體，在新的宿主生物體中正常表達。質粒DNA可以作為疫苗或治療性藥物單獨使用，或在病毒載體生產中作為病毒包裝的原料。

質粒制備的步驟

質粒制備流程圖

質粒制備常見問題

Q：轉化后克隆數量少

A：可以設置陰性和陽性對照。克隆過程中，陰性對照-空載長出菌落，判定可能是酶切不完全導致，陽性對照不出斑，可能是轉化實驗的操作出現問題。感受態細胞切勿反復凍融，且熱激時間一定要精準到秒，同時正確使用抗生素或其他篩選標記。

Q：菌落太多但假陽性率高，挑不到正確克隆

A：菌落PCR鑒定引物需跨區域設計，一條引物設計在載體上，另外一條在目標片段上。如此可避免假陽性克隆又篩除反向插入片段，還可以通過提取質粒酶切跑膠進一步排除錯誤克隆。

Q：大腸桿菌老化

A：建議涂布平板培養后，重新挑選新菌落進行液體培養。

Q：質粒未全部溶解

A：洗脫溶解質粒時，可適當加溫或延長溶解時間。

Q：質粒提取不成功

A：裂解時間過長，一般不應超過5分鐘。吸附時間，溶解時間不夠都會導致質粒DNA提取實驗失敗。

質粒制備|泓迅生物

泓迅生物擁有完善的質粒制備生產線，確保提供無RNA污染、無基因組污染的高質量無菌質粒，可將內毒素含量控制在較低水平（< 100EU/mg、<30EU/mg、<5EU/mg，供選擇）。另外我們還提供序列驗證、限制酶酶切和內毒素分析等服務，滿足各領域客戶多樣化的下游應用，如轉染、抗體制備，疫苗和基因治療研究等。

案例分享——轉染級質粒制備

將質粒轉化后挑取單克隆菌落進行培養，抽提菌液進行酶切及測序驗證，對符合要求的質粒進行大批量接菌抽提，之后對各批次抽提質粒進行酶切驗證，無誤后混合所有抽提質粒，最后對大抽質粒進行去內毒素處理，48h細菌檢測如圖1所示。

圖1 內毒素檢測

內毒素檢測結果為陰性對照不凝固，陽性對照凝固，測試稀釋樣品不凝固，標準品不凝固，證明去內毒素處理成功。

經過細菌檢測結果比對，48h無抗培養基均不長斑，通過無菌檢測。